快速細(xì)菌檢驗方法
摘要：水的微生物學(xué)上的衛(wèi)生狀態(tài)是以大腸菌群或希氏大腸菌評價的。但現(xiàn)今采用的檢驗方法（以下稱現(xiàn)有法），從判斷試驗、確認(rèn)試驗到全面試驗得到最終結(jié)果，在陰性的場合試驗時間為2 日，陽性的場合要達(dá)到確認(rèn)試驗為4日，完成全面試驗則需要5 日。從而，在確定原水受污染以前，污染的水就會被居民飲用，給居民增加很大的負(fù)擔(dān)。另外以現(xiàn)有法檢驗對象的大腸菌存在于自然環(huán)境中，直接與人體健康有害的作為指標(biāo)的細(xì)菌，特別是埃希氏大腸菌的試驗，還沒有快速且準(zhǔn)確的良好檢出試驗方法。最近新的試驗方法已被開發(fā)出來。這種方法能夠在24小內(nèi)將大腸菌和埃希氏大腸菌同時檢出，相當(dāng)實用。
關(guān)鍵字：快速 細(xì)菌 檢驗
1、前言
水的微生物學(xué)上的衛(wèi)生狀態(tài)是以大腸菌群或希氏大腸菌評價的。但現(xiàn)今采用的檢驗方法（以下稱現(xiàn)有法），從判斷試驗、確認(rèn)試驗到全面試驗得到最終結(jié)果，在陰性的場合試驗時間為2 日，陽性的場合要達(dá)到確認(rèn)試驗為4日，完成全面試驗則需要5 日。從而，在確定原水受污染以前，污染的水就會被居民飲用，給居民增加很大的負(fù)擔(dān)。另外以現(xiàn)有法檢驗對象的大腸菌存在于自然環(huán)境中，直接與人體健康有害的作為指標(biāo)的細(xì)菌，特別是埃希氏大腸菌的試驗，還沒有快速且準(zhǔn)確的良好檢出試驗方法。最近新的試驗方法已被開發(fā)出來。這種方法能夠在24小內(nèi)將大腸菌和埃希氏大腸菌同時檢出，相當(dāng)實用。
2、試驗方法和試驗研究目的
這種方法是在臨床實驗室中以特定基質(zhì)法概念作為基礎(chǔ)，將尿中微生物識別出來。作為試驗?zāi)康倪h(yuǎn)規(guī)定的這一方法，單單只是利用細(xì)菌繁殖的僅有特定的基質(zhì)這一點而言，就與現(xiàn)有法不同。其培養(yǎng)劑是硫酸銨（氨素來源）、鹽類維他命、加上兩種加水有分解可能的基質(zhì)，這兩種基質(zhì)及作用為，（1）利用鄰-硝基苯-半乳糖吡喃苷加水分解反應(yīng)，使大腸菌群由無色變成黃色，（2）利用場-甲基傘形苯-葡萄酸苷加水分解反應(yīng)使埃希氏大腸菌發(fā)出明顯螢光。這種生物反應(yīng)化學(xué)的反應(yīng)機(jī)理非常特別，因此不需要做確認(rèn)試驗。
為了把此方法在供水上應(yīng)用于檢測細(xì)菌，在供水研究基金會和美國環(huán)保局支持下，進(jìn)行了法和當(dāng)前使用的多管發(fā)酵管法及濾膜法調(diào)查比較。本次研究的目標(biāo)有以下12項。
*大腸菌群及埃希氏大腸菌以cfu/100ml的濃度檢出。
*存在于起始濃度的菌類，在4-24小時內(nèi)有確認(rèn)結(jié)果。
*在沒有做大腸菌和埃希氏大腸菌的確認(rèn)試驗及識別試驗的情總況下，能同時定量。
*規(guī)定用埃希氏大腸菌認(rèn)定。
*不受HPC細(xì)菌妨害。
*總費用減少。調(diào)整完畢后的試藥即使不冷藏也可長期保存。
*在腸菌群繁殖和目標(biāo)微生物代謝呈色的反應(yīng)等相當(dāng)明確，不需要有確認(rèn)追加試驗。
*有否試驗必要計數(shù)的場合，能用法試驗。
*試驗方法掌握簡單。
*小型供水及大型供水用此方法都適當(dāng)。
在經(jīng)同意此調(diào)查的多數(shù)供水事業(yè)單位合作下，進(jìn)行了廣泛的調(diào)研。試樣由所有配水系統(tǒng)采取。
3、結(jié)果
不論使用法或法的哪一種手段，當(dāng)今使用的方法和法，在統(tǒng)計上都沒有意義的差別。兩種方法決定系數(shù)0.78,認(rèn)為有很高的相關(guān)系統(tǒng)數(shù)。從而兩種方法所得結(jié)果，在質(zhì)上其數(shù)據(jù)基底是相同的。因此，供水事業(yè)單位雖然改用法，當(dāng)前使用的數(shù)據(jù)庫依然能夠有效。
以法的陽性管做二次培養(yǎng)，調(diào)查是否存在目標(biāo)微生物。但在以法為陽性場合，必定存在有作為目標(biāo)的微生物，因此，不必做確認(rèn)試驗。
４、考察
由于法的特殊優(yōu)越性，已在使用上證明有著充分的感應(yīng)效果。所以美國環(huán)保局于1992年在施行的新規(guī)則中、認(rèn)定了此新的大腸菌群和埃希氏大腸菌的檢測方法，并已于標(biāo)準(zhǔn)法18版刊載。有幾個重要優(yōu)點。因為現(xiàn)有法必須以乳糖為基本培養(yǎng)劑，其做確認(rèn)試驗得到結(jié)果要用幾天時間，而法在于24小時以內(nèi)就可確認(rèn)結(jié)果，適時的得到凈水微生物情況的水質(zhì)情報，因此就可大大的節(jié)省經(jīng)費。水質(zhì)試驗室已有做大腸菌群試驗的細(xì)菌培養(yǎng)箱，因此要添設(shè)的必要設(shè)備，只需要添設(shè)廉價紫外線燈而已。隨之在人員雇用經(jīng)費的節(jié)約上，由于在培養(yǎng)調(diào)整，試樣分析，確認(rèn)試驗，洗刷試驗器具等方面，使試驗室人員操作的便利性有所提高。分析時向節(jié)約解決了新規(guī)則需要增加的試樣數(shù)量和復(fù)雜的要求。
其他的優(yōu)點是，用這種方法的以糞便性大腸菌群做的試驗，沒有受到假陽性的溫度耐性的克雷伯氏菌屬的妨害。供水事業(yè)單位在大腸菌群試驗為陽性的場合下，在整體上，由于行使糞便性微生物（糞便性大腸菌或埃氏大腸菌）試驗要求，所以有此種克雷氏菌屬的繁殖，必須向管理居民健康的監(jiān)督官報告。普通見到的一種大腸菌群的克雷伯氏菌屬，有約法三章15%的有著溫度耐性。因此這樣事態(tài)經(jīng)常發(fā)生？死撞暇鷮匐m常存在飲用水中，但對人體健康無害處，由于證明攜帶這種菌的式樣，對飲用者健康沒有風(fēng)險，因此也就沒有再采樣與再試驗的必要性。這種方法已有多數(shù)國家開始應(yīng)用，并利用其于發(fā)國家地區(qū)水道調(diào)查，颶風(fēng)和地震后的水質(zhì)評價，供水管道更新后配水系統(tǒng)污染評價等。
在這種有利的情況下，法就成為給水新型的分析手段，它增強(qiáng)了效率，并是投資少收效高的微生物水質(zhì)監(jiān)測方法。此試驗方法于數(shù)年內(nèi)，在供水事業(yè)單位和有關(guān)涉及健康的組織普及，而未發(fā)生誤碼差（本雜志1989-1有詳細(xì)介紹）。
在會議中，除此以外，還利用根據(jù)將共同存在于腸內(nèi)細(xì)菌科的細(xì)菌抗原檢出的新免疫學(xué)法，迅速檢出腸內(nèi)細(xì)菌科的細(xì)菌的方法，作為迅速試驗方法的提案提出。
這種方法由醫(yī)科大學(xué)和給水研究所共同研究開發(fā)，它是以乳糖、胨、肉湯繁殖細(xì)菌培養(yǎng)以后，將存在于外膜的氨基糖連續(xù)鏈結(jié)合——葡萄糖——磷脂酰殘基（與腸內(nèi)細(xì)菌科共同而且僅限定于此的特異病原），以抗體的免疫學(xué)的方法檢出。檢驗利用多層的用4小時完成。檢驗范圍105——106細(xì)菌數(shù)/ml，必須有前培養(yǎng)程序。它是在整個試驗時間24小時，在100 ml中檢出1個埃希氏大腸菌或1 個大腸菌群的方法。
此方法在給水實際運(yùn)行當(dāng)中很適合應(yīng)用，并已得出良好的效果。
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